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細胞培養新手答疑帖（內含污染、傳代、復蘇的問題&解析）
發布時間： 2025-04-27 點擊次數： 607次1.污染
Q：以下圖片中的細胞是否已污染？這些小黑點，PBS沖洗能去掉大部分，但第二天會重新出現。
A：圖中的細胞存在微生物污染，在細胞與細胞間隙之間，有大量的小黑點聚集，且形狀基本上都是規則的顆粒狀。
當使用PBS沖洗時，能洗掉大部分，但卻無法全部清楚，因為只要殘留極少量的微生物，還是會繼續繁殖的。
從問題描述來看，PBS沖洗后第二天黑點就重新出現，憑這一點就可以輔助我們進行判斷——這是微生物污染。如果PBS沖洗后，黑點不再出現，那么黑點可能只是培養物碎片/雜質，但如果會不斷增加、無法全部清除，就肯定是污染。
有同學可能會疑惑，我不是在培養基中加了雙抗么，為什么還會污染呢？
雙抗，能抑制微生物增殖，但無法全部殺滅微生物。當污染達到一定程度后，雙抗也就無法繼續抑制它們的增殖，而隨后，你就能在顯微鏡下看到微生物污染了。此時，雙抗對微生物的影響已經失效。
對于上圖的細胞，我們只能扔棄，避免其波及其他培養瓶內的細胞。
相應的，這里也貼出一張正常狀態、沒有微生物污染的細胞，在視野內細胞與細胞的間隙是很干凈的，沒有黑點、桿狀、絲狀物，細胞也基本上是完好無損的，沒有解體的細胞。
2.傳代
Q：以下圖中的細胞狀態正常嗎？繼續培養還是消化傳代？
A：圖中的細胞密度已經達到了100%，細胞與細胞之間已經沒有任何空隙，所以我們看到這些細胞都擠成一堆了，它原本是什么形態的根本無法觀察出來。
當細胞的密度達到100%時，細胞就會與周圍的細胞全部貼合在一起，產生“接觸抑制"，表現為停止增殖，隨后就是細胞狀態開始下滑——進入衰退。
如果拿這個狀態的細胞去做實驗，效果會受到影響。大家要盡量避免細胞長得太密才進行消化傳代。以下是我們之前提供過的一張細胞密度示意圖。一般來說，80%-90%的密度就可以消化了。
3.復蘇
Q：以下圖中的細胞是復蘇后第二天的，細胞（貼壁生長的）還活著嗎？
A：復蘇后的細胞，如果是貼壁生長的，一般種入培養器皿后大約10-16小時就可以貼壁生長了。
圖中的細胞并沒有貼壁的形態，仍然是圓形的，可以判斷出復蘇操作失敗了，視野內的細胞應該都是沒有存活下來的。 我們進一步了解當時的操作細節，發現復蘇時有兩個重要細節：1 凍存區和水浴鍋相隔很遠，走路要2分鐘；2 放入水浴鍋后，大約還經過了2分鐘才完成解凍。 細胞復蘇要遵循“快融"這一個原則，因為細胞從低溫到室溫的升溫過程中，細胞內會重新形成冰晶，冰晶對細胞的損傷很大，如果不能盡快讓細胞跨過這個階段，則細胞復蘇后的狀態會較差。 我針對上面提到的操作細節，給出的建議是：從凍存區拿出細胞后，應該用最快的速度沖去水浴鍋進行解凍。 解凍的過程也要盡快完成，可以嘗試拿一個塑料薄膜手套裝著凍存管，然后鑷子夾住管子和薄膜手套部分，深入水中不斷搖晃，觀察到管內已經全是液體后，立即停止并盡快進入下一步操作。
以上就是本期答疑帖的全部內容，如果需要PBS、雙抗溶液可以向我們咨詢，歡迎關注安培生物科技有限公司了解更多技術與產品資訊。
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