-
測定蛋白含量都有哪些方法？
發布時間： 2022-11-01 點擊次數： 2925次蛋白的含量的測定方法主要有紫外分光光度法、Lowry法、BCA法等。
紫外分光光度法
原理
蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基的苯環在275~280mm有一紫外吸收峰。在一定濃度范圍內，其在280mm的吸光度與蛋白濃度成正比。
方法
取適量蛋白溶液（約3.5ml），置于光徑為1cm的石英比色杯、用與溶解蛋白的緩沖液相同的緩沖液為對照，在280mm波長處測定吸光度，吸光度為1.0的蛋白溶液，蛋白濃度約為1.0mg/ml。當溶液中含少量核酸時，應同時測定260nm波長處的吸光度，以下式估算蛋白濃度：蛋白濃度（mg/ml）=1.55A280-0.75A260。該測定方法誤差較大，有紫外光吸收的物質（如核酸）干擾大。
材料和儀器
（1）4%Na?CO3；（2）0.2mol/LNaOH；（3）1%CuSO4；（4）2%酒石酸鈉。試劑A：使用前，將(1)(2)(3)(4)試劑以50：50：1：1的比例混合均勻，當天使用。試劑B：酚試劑。
Lorry法
Lowry法靈敏度較高，線性范圍為20~100ug/ml。該方法干擾因素主要有：高濃度的胍鹽、尿素等變性劑，Triton、Tween等去垢劑，EIDTA等整合劑，以及Tris、甘氨酸等等。
材料和儀器
材料：（1）4%Na?CO3；（2）0.2mol/LNaOH；（3）1%CuSO4；（4）2%酒石酸鈉。試劑A：使用前，將(1)(2)(3)(4)試劑以50：50：1：1的比例混合均勻，當天使用。試劑B：酚試劑。
儀器：分光光度計。
操作步驟
（1）準確稱取10mg標準蛋白（常用牛血清白蛋白或人血清白蛋白）加蒸餾水溶解定容至100ml。
（2）取6支試管分別編為0~5號，分別加入步驟（1）制備的標準蛋白溶液0、0.08、0.16、0.24、0.32、0.40ml，并都用蒸餾水補足至0.4ml。
（3）各試管加入試劑A 2ml，混勻，室溫放置10分鐘。
（4）各試管加入試劑B 0.2ml，立即混勻，室溫或37℃水浴中，保溫30分鐘。
（5）在分光光度計上，以0號為參比，測定各管樣品在750mm的吸光度值。
（6）以蛋白濃度為橫座標，吸光度為縱座標繪制標準曲線，或作直線回歸。
（7）取樣品溶液0.4ml，按步驟（1）~（5）測定，將測得的吸光度值代入上述標準曲線，計算蛋白濃度。
注意：如果樣品濃度過高，可用蒸餾水作適當稀釋。
BCA法
BCA法的優點是抗干擾能力強，其原理是：在堿性溶液中，蛋白將二價銅還原成一價銅，后者與試劑中的BCA（二辛可酸，Bicinchoninic acid）形成一個在562mm處具有最大吸光度的紫色復合物，其吸光度與蛋白濃度成正比，線性范圍20~100ug/ml。
材料和儀器
試劑A：1%BCA二鈉鹽，2%碳酸鈉，0.16%酒石酸鈉，0.4%氫氧化鈉和0.95%碳酸氫鈉。用50%NaOH或碳酸氫鈉調pH11.25。
試劑B：4%硫酸銅
工作液：100倍體積試劑A與2倍體積試劑B混合。
操作步驟
（1）準確稱取10mg標準蛋白（常用牛血清白蛋白或人血清白蛋白）加蒸餾水溶解定容至100ml。
（2）取6支試管分別編為0~5號，分別加入步驟1制備的標準蛋白溶液0、20、40、60、80、100 ul，并都用蒸餾水補足至100ul。
（3）各試管加入工作液2ml，混勻，37℃水浴保溫30分鐘。
（4）在分光光度計上，以0號為參比，測定各管樣品在562mm的吸光度值。
（5）以蛋白濃度為橫座標，吸光度為縱座標繪制標準曲線，或作直線回歸：
（6）取樣品溶液100 ul，按步驟1~4測定，將測得的吸光度值代入上述標準曲線，計算蛋白濃度。
注意：如果樣品濃度過高，可用蒸餾水作適當稀釋。
以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務，努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業
- 下一篇：免疫細胞轉染實驗失敗了千萬不要慌！
- 上一篇：如何才能把細胞培養好？
銷售熱線
