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怎樣辨別是否細(xì)胞污染？

發(fā)布時(shí)間： 2022-11-01　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1816次

培養(yǎng)細(xì)胞最擔(dān)心的就是細(xì)胞污染，這期繼續(xù)分享如何辨別細(xì)胞污染的經(jīng)驗(yàn)。

★識(shí)別支原體污染
這是一種很難發(fā)現(xiàn)卻經(jīng)常存在的問題。

支原體是最小的（0.3 μm）能夠自我復(fù)制的有機(jī)體，倒置顯微鏡下通常觀察不到。

支原體沒有細(xì)胞壁，對(duì)常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺的，可能直到出現(xiàn)了可以觀察到的病變或發(fā)現(xiàn)細(xì)胞正常功能喪失的時(shí)候，才意識(shí)到是發(fā)生了支原體感染。

在沒有采用特殊的染色方法，也沒有觀察到病變的情況下，實(shí)驗(yàn)總是不成功，就應(yīng)懷疑被支原體污染。預(yù)防支原體污染的惟-途徑是經(jīng)常對(duì)細(xì)胞進(jìn)行篩選。

★防止支原體感染

只使用那些證明沒有污染支原體的血清和培養(yǎng)基。

只接受那些保證沒有支原體感染的細(xì)胞。

注意：當(dāng)你怎么樣也得不到一種細(xì)胞表面蛋白的抗體，或不能有效地表達(dá)某種蛋白質(zhì)時(shí)，可能是由于使用了被支原體感染的細(xì)胞。

★檢測(cè)支原體感染
如果這株細(xì)胞對(duì)你十分重要，那么就應(yīng)該每4~6周對(duì)細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，通常使用下面幾種方法：
●支原體的熒光染色是簡(jiǎn)單、便宜也是常用的方法。
●使用支原體的特異引物進(jìn)行PCR檢測(cè)。如果實(shí)驗(yàn)室具備PCR儀和電泳條件，那么這種方法可能是尤為簡(jiǎn)單的手段。可以自己設(shè)計(jì)引物（設(shè)計(jì)好恰當(dāng)?shù)膶?duì)照），也可以從公司購(gòu)買引物。
●把細(xì)胞樣品送到能進(jìn)行支原體檢測(cè)的公司檢測(cè)。這樣做雖不如自己檢測(cè)快（盡管托給公司比較容易，但會(huì)很貴），只有一個(gè)好處就算是不用自己親自動(dòng)手。

注意：如果你發(fā)現(xiàn)了支原體污染
●合適的方法是立即把細(xì)胞丟棄，從新復(fù)蘇。
●可以不理會(huì)它。
●可以采取某些挽救措施，但是會(huì)很困難，只適用于那些不可代替的細(xì)胞。簡(jiǎn)單的方法是訂購(gòu)除去支原體的試劑盒。

★交叉污染
細(xì)胞還可能被別的細(xì)胞污染，這種交叉污染可能更廣泛，許多實(shí)驗(yàn)人員在不經(jīng)意之間培養(yǎng)、使用和凍存了其他的細(xì)胞。
如何避免交叉污染：
●只從有保障的地方得到細(xì)胞，或者自已檢查細(xì)胞。
●不要同時(shí)操作多株細(xì)胞。不要把多種培養(yǎng)瓶同時(shí)放在超凈臺(tái)內(nèi)。
●不要使用同一個(gè)移液管操作多種細(xì)胞。
●不同細(xì)胞株不要使用同一瓶培養(yǎng)基或胰蛋白酶。
●操作后不要把移液管放回培養(yǎng)基的瓶中。
●培養(yǎng)維護(hù)時(shí)，使用栓塞式移液管。

注意：
如果你的細(xì)胞生長(zhǎng)情況或功能突然發(fā)生了變化，在排除支原體污染后，檢查你的細(xì)胞是否發(fā)生了交叉污染（這些變化也可能是發(fā)生了突變或漂變）。

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