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細胞侵襲實驗詳解剖析
發布時間： 2022-04-13 點擊次數： 2526次細胞侵襲也是與轉移密不可分的。那么今天要分享的是最為常用的細胞侵襲方法：Transwell侵襲實驗。與細胞劃痕實驗相比，Transwell相對過程復雜一些，下面就一起看看腫瘤細胞Transwell侵襲實驗吧！ 
細胞侵襲實驗示意圖 首先，為了對腫瘤侵襲和轉移有更加清晰的理解，我們先來了解一下，腫瘤細胞轉移的過程，主要包括以下5個過程：原位侵襲（Local invasion），腫瘤細胞內滲（Intravasation），循環系統存活（Survival in thecirculation），腫瘤細胞外滲（Extravasation），形成轉移灶（Micrometastasis formation）等。其中細胞侵襲便發生在第一步，即腫瘤細胞在原位突破基底膜，然后內滲進入血管、淋巴管的過程，后期才開始進行轉移。 
腫瘤細胞轉移的過程 Trans可譯為轉移，穿過，而well則為小室的意思。外形如同一個小杯子（如下圖），杯底有通透性的膜（孔徑0.1－12.0µm，細胞侵襲一般用8.0、12.0μm）。 
Transwell原理簡單來說，就是將Transwell小室放入培養板中，并將高營養液與低營養液用一層膜隔開，并在膜上室鋪基質膠，用來模擬體內細胞外基質。腫瘤細胞放在低營養液中，為了獲得更多的營養吃的更飽，這些細胞需先分泌基質金屬蛋白酶（MMPs）將基質膠降解，才能穿過這層膜，進入高營養液，最后通過計數下室的細胞量即可反映腫瘤細胞的侵襲能力。細胞Transwell實驗，可作為一種非常簡便的研究腫瘤細胞遷移、侵襲以及轉移情況的方法。 實驗做完后就是最重要的結果統計了！ 檢測穿過的細胞數一般有兩種方法： 1.直接計數法 ①“貼壁"細胞計數 這里所謂的“貼壁"是指細胞穿過膜后，可以附著在膜的下室側而不會掉到下室里面去。可以通過給細胞染色（如結晶紫染色、臺盼藍染色、Giemsa染色、蘇木精染色、伊紅染色），在鏡下計數細胞。 ②“非貼壁"細胞計數 由于某些細胞自身的原因或某些膜的關系，有時細胞在穿過膜后不能附著在膜上，而是掉進下室。這種情況下可以收集下層培養液，用流式細胞儀計數細胞量，也可用細胞計數的方法直接在鏡下計數。 2.間接計數法 間接計數法主要用于穿過細胞過多，而無法通過計數獲得準確的細胞數所采用的方法，通過標記、染色處理（例如MTT法、熒光試劑檢測、結晶紫檢測）后，測量OD值或熒光值，間接反映細胞數量。 文章中出現的Transwell侵襲實驗圖一般是這樣的： 
（小tips：NC 即Negative control，表示陰性對照，siRNA上期剛說過，大家還記得嗎？ 文章中大家可能還會遇到MOCK組，其實就是空白對照。所謂的空白對照有兩種：一種是什么也不處理，類似陰性對照組；一種是只加轉染試劑，不加轉染的質粒或者siRNA，類似假手術組） 這張圖表示的是NC組（對照組）細胞侵襲少于siRNA組（沉默某基因的表達），可以理解為沉默某基因后，可以促進HGC-27細胞的侵襲。 當然，這張圖是比較簡單的，復雜一點的無非就是條件多了，數據多了，大家只要理清楚細胞侵襲實驗的原理，知道圖是怎么做出來的，對應著圖注都可以很輕松的理解圖所表達的意思。 以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
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