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羊膜腔接種
發布時間： 2022-03-25 點擊次數： 2840次羊膜腔接種主要應用于從臨床材料中（如患者咽嗽液等）分離流感病毒等操作。這種接種途徑可直接感染羊膜腔的內胚層，也可被雞胚咽下或吸入，引起全胚胎感染。另外，病毒也可被排泄到尿囊腔中，使尿囊液中含有大量病毒。因此，在用羊膜腔接種分離病毒時，除可收獲羊水以外，還可收獲尿囊液。
原理
雞胚接種技術的原理是用病毒（如牛痘病毒（vaccinia virus）和雞新城疫病毒（Newcastle-disease virus））接種雞胚。 牛痘病毒適宜于在絨毛尿囊膜上生長，經培養后，產生肉眼可見的白色痘皰樣病變，似小結節或白色小片云翳狀。 雞新城疫病毒適宜接種在尿囊腔和羊膜腔內，生長后，雞胚全身皮膚出現出血點，以腦后zui顯著。 雞胚培養法是用來培養某些對雞胚敏感的 動物病毒 的一種培養方法，此方法可用以進行多種病毒的分離、培養，毒力的滴定，中和試驗以及抗原和疫苗的制備等。
材料與儀器
器材：
①孵卵箱
②檢卵燈、照明燈、卵杯、卵盤、雞胚開孔器
③注射器
④眼科用剪刀和攝子、酒精燈和毛細吸管
試劑：
①材料：受精雞卵最好選擇健康來亨雞受精卵，因為來亨雞的卵殼潔白易于照視觀察，如無此卵也可選擇其他受精雞卵。用于病毒培養的受精雞胚，最好是來自無特定病原體雞群 。
②消毒劑（2.5％ 碘酒和 75% 酒精）
③2％ 來蘇兒液步驟
羊膜腔接種的基本過程可分為如下幾步：
( 1 ) 接種步驟與方法
1 ) 將 10- 12 日齡的雞胚在檢卵燈上照視，劃出氣室范圍，并在胚胎最靠近卵殼的一側做記號。
2 ) 用 2.5％ 碘酒及 75％ 酒精分別消毒氣室部位的蛋殼，并用開孔器在氣室頂端鉆出一約 10 mmx6 mm 的長方形裂痕，注意勿鉆破殼膜 。
3) 用 2.5％ 碘酒再次消毒鉆孔區后，用滅菌的眼科小攝子除去長方形卵殼和外層殼膜，并滴加滅菌液狀石蠟一滴于下層殼膜上使其透明，以便觀察胚胎的位置。
4) 將注射器刺向胚胎的騰下胸前，以針頭撥動下顆及腿，當進入羊膜腔內時，可看到雞胚隨針頭的撥動而動，此時可注入 0.1 -0.2 mL 病毒液。
5 ) 拔出針頭，孔區先用 2. 5％ 碘酒消毒，然后用沾有碟酒通過火焰的小塊膠布將卵殼的小窗口封住，并于 33-35 ℃ 孵卵器內孵育 48~72 小時，此過程要保待雞胚的氣室朝上 。
(2) 解剖與收獲
1) 收獲前雞胚須置 4 ℃ 冰箱 6 小時或過夜，但不能放置時間過長（過長會引起散黃）。如急于收獲亦可置－20 ℃ 冰箱 1 小時左右。預冷的目的是將雞胚凍死，使血液凝固，避免收獲時流出紅細胞，并同尿囊液中的病毒發生凝集，造成病毒滴度下降。
2) 用 2.5％ 碘酒和 75％ 酒精分別消毒氣室處的卵殼，并用滅菌剪刀剪去氣室部的卵殼，此時勿使其碎片落于未損傷的殼膜上。用無菌毛細吸管吸取尿糞液，然后左手持小攝子夾起羊膜成傘狀，右手用毛細吸管插入羊膜腔吸取羊水，平均每胚可收獲 0.5-1.0 mJ羊水。
3) 病毒通過胚胎機體后被排泄入尿囊腔，因此當羊水過少時，可用同胚少量尿攪液沖洗羊膜腔并吸取該洗液。注意事項
1. 防止污染 為了減少污染，整個過程均需無菌操作，否則雞胚一經污染，即迅速死亡或影響病毒的培養 。
2. 適宜的培養溫度 接種過的雞胚，應根據實驗病原繁殖所需溫度，放入 33~37 °C 溫箱內培養 。以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
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