-
備擇方案 2 示蹤標記細胞
發布時間： 2022-03-10 點擊次數： 1471次原理
材料與儀器
細胞懸液／貼壁細胞 [35S]標記L-甲硫氨酸（>800 Ci／mmol)／[35S]標記蛋白質水解產物
PBS(冷凍) 37℃ 示蹤培養基
配有液體同位素垃圾閥門的真空吸氣器步驟
1. 每個時間點和每個樣品準備 0.5 × 107 ~2 × 107 細胞， 每 0 .5 × 107 ~2 × 107 細胞用 2 ml 0.1~0.2 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸脈沖標記 10~30 min （見基本方案步驟 1~4，或見備擇方案 1 步驟 1~5）。
2. 去除 [35S] 甲硫氨酸的工作溶液，用 10 ml 37℃ 的示蹤培養基洗一次，并加入 10 ml 37℃ 的示蹤培養基。
3. 37℃ 培養到預期時間。擰緊試管蓋子在旋轉情況下培養細胞懸液。在 032 培養箱里孵育貼壁細胞。
4. 刮取貼壁細胞并轉移到 15 ml 離心管。收集刮取的細胞或細胞懸浮液于 4℃ 300 g 離心 5 min。
5. 可選：通過 TCA 沉淀法測定標記摻入的量（見輔助方案）。
注意事項
1. 將2倍體積含有過量未標記甲硫氨酸（15mg/L）的示蹤培養基直接加入到標記混合物中，能夠快速終止標記反應。
2. 示蹤≤2 h，細胞懸液的最終濃度應該是 2 × 106 細胞/ml，或示蹤>2 h，用 0.5 × 106 細胞/ml。 對貼壁細胞而言，加 10 ml/100 mm 平皿。
常見問題
1. 上清可以棄掉，也可以收集起來用于分析分泌或脫落到培養基中的蛋白質。
2. 如果細胞沉淀不馬上使用的話，見基本方案步驟7。
同實驗其他方法
氨基酸代謝標記實驗
1. 室溫融化 [35S] 標記甲硫氨酸，并用預熱的（37℃）脈沖標記培養基制備 0.1~0.2 mCi/ml 的工作溶液。2. 室溫下 300 g 離心 5 min，獲得懸液中 0.5 × 107~
備擇方案 1 對貼壁細胞
1. 在 100 mm 組織培養皿中培養細胞到 80%~90% 融合（0.5 × 107~2 × 107 細胞，取決于細胞類型）。2. 如上所述制備 [35S] 甲硫氨酸的工作液體（見基本方案步驟 1
備擇方案 3 長期細胞標記
1. 在預熱的 37℃ 長期標記培養基中制備 0.02～0.1 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸工作溶液（見基本方案步驟 1）。2.1 對于懸浮細胞：用預熱的長期標記培養基準備并洗細胞一次
以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務，努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業。
- 下一篇：備擇方案 3 長期細胞標記
- 上一篇：備擇方案 1 對貼壁細胞
銷售熱線
