-
細胞培養常見問題及解答（二）
發布時間： 2021-12-09 點擊次數： 2099次接上一期，本期我們繼續分享細胞培養常見的問題吧~
12. 附著性細胞繼代時所使用的trypsin-EDTA 濃度？應如何處理？
一般使用的trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53 mM EDTA Na4。 第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于-20 ℃，避免反復冷凍解凍造成trypsin 的活性降低，并可減少污染的機會。
13. 欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速？
回收動物細胞，其離心速率一般為300xg (約1 000 rpm)，5-10 分鐘，過高的轉速，將造成細胞死亡。
14. 細胞冷凍培養基的成份為何？
動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養基是含5-10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90-95% 原來細胞生長用的新鮮培養基均勻混合之。注意：由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能，故不可將DMSO 直接加入細胞液中，必須使用前先行配制完成。
15. DMSO 的等級和無菌過濾的方式為何？
冷凍保存使用的DMSO 等級，必須為Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)，其本身即為無菌狀況，第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于4℃，避免反復冷凍解凍造成DMSO 的裂解而釋出有害物質，并可減少污染的機會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO 的Nylon 材質濾膜。
16. 冷凍保存細胞的方法？
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20℃ 30 分鐘*) → -80℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序的可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃至-80℃以下，再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20℃不可超過1 小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟，接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微 降低一些。
17. 細胞欲冷凍保存時， 細胞冷凍管內應有多少細胞濃度？
冷凍管內細胞數目一般為1x106 cells/ml vial，融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。
18.培養基中是否須添加抗生素？
除于特殊篩選系統中外，一般正常培養狀態下，培養基中不應添加任何抗生素。
19. 應如何避免細胞污染？
細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉漿菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環境不佳、污染的血清和污染的細胞等。嚴格的無菌操作技術、清潔的環境、與品質良好的細胞來源和培養基配制是減低污染的最好方法。當然，適當添加抗生素也是防止細胞污染的途徑。
以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎關注安培生物科技有限公司了解更多技術與產品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務，努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業。
- 下一篇：細胞培養常見問題及解答（三）
- 上一篇：細胞培養常見問題及解答（一）
銷售熱線
