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如何選擇細胞培養(yǎng)用液和使用注意事項

發(fā)布時間： 2021-12-08　　點擊次數(shù)： 2277次

細胞培養(yǎng)當中，選擇好合適的培養(yǎng)用液和正確使用培養(yǎng)用液都是細胞培養(yǎng)得好的關鍵，本期小編結合過往經驗分享給大家，希望能給大家的細胞培養(yǎng)帶來幫助。

1、如何正確選擇培養(yǎng)基種類？
引用幾款比較經典的培養(yǎng)基舉例：

2、如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？
培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在 MEM 中培養(yǎng)的細胞，很可能在 DMEM 或 M199 中同樣很容易生長。總之，首先選 MEM 做粘附細胞培養(yǎng)，RPMI-1640 做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始。

3、什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為 PH 值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，培養(yǎng)細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

4、細胞培養(yǎng)基的配制和儲存應該注意什么？
細胞培養(yǎng)基配好后，要先抽取少許放入培養(yǎng)瓶內在37℃培養(yǎng)箱內放置24~48h，已檢測培養(yǎng)液是否有污染，然后方可用于實驗。配置培養(yǎng)基所需的血清要合格并且保持穩(wěn)定。一個批號試用效果良好后，就可一次購入較多同一批號的血清，這樣實驗條件穩(wěn)定，配液時調整pH值較容易。每次配液量以使用兩周左右的量為宜，一次配液不要太多，一是短期內用不完造成營養(yǎng)成分損失需要補充，二是量大易造成污染。

5、為何培養(yǎng)基保存于 4 ℃ 冰箱中，顏色會偏紫色？
培養(yǎng)基保存于 4 ℃ 冰箱中，培養(yǎng)基內的 CO2 會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性，而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑（通常為 phenol red）的顏色也會隨堿性增加而更偏紫色。培養(yǎng)基偏堿的結果，將造成細胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時，可以通入無菌過濾 CO2，以調整 pH 值。

6、什么情況下用到無血清培養(yǎng)基？
對于應用培養(yǎng)細胞進行分離制備細胞生長因子、單克隆抗體等應該選擇無血清培養(yǎng)基。

7、如何選擇正確的血清種類？

8、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的血清種類？
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

9、血清滅活是否必須？
一般情況下不建議。熱滅活是以 56℃，30 分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應有：溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。
實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在 37C 環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此除了做免疫學相關實驗和培養(yǎng)一些特定細胞，如平滑肌細胞、胚胎干細胞等，不需要做熱滅活處理。

10、培養(yǎng)基中是否添加抗生素？
除特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素。

11、何時更換培養(yǎng)基？
視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。

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