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您的細(xì)胞養(yǎng)得好嗎？怎樣才能養(yǎng)好呢？

發(fā)布時間： 2021-11-29　　點擊次數(shù)： 2026次

細(xì)胞培養(yǎng)是實驗室里最常見和最基本的實驗了。您的細(xì)胞養(yǎng)的好嗎？您對細(xì)胞培養(yǎng)體系了解嗎？培養(yǎng)基對細(xì)胞培養(yǎng)影響大嗎？……
細(xì)胞培養(yǎng)，蘊(yùn)含著大學(xué)問。有時候細(xì)胞狀態(tài)不好，轉(zhuǎn)染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說起。

培養(yǎng)基
細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補(bǔ)加血清、抗生素等成分。培養(yǎng)基主要包括天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基和無血清細(xì)胞培養(yǎng)基等。
經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，Invitrogen (GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma、Procell（普諾賽）等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用*泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。

培養(yǎng)基種類及介紹(部分）
MEM
是由Eagle’s基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的，其中增加了組分的范圍及濃度。
DMEM
Dulbecco改良的BEM(DMEM )培養(yǎng)基是為小鼠成纖維細(xì)胞設(shè)計的，現(xiàn)在常用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來為了某些細(xì)胞的生長需要，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L，這就是大家常說的低糖和高糖了。
RPMI 1640
是專為淋巴細(xì)胞培養(yǎng) 而設(shè)計的，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)。

MEMα
含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸，它可廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞類型，包括對營養(yǎng)成分要求苛刻的細(xì)胞。
Ham’s F12
是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而設(shè)計的，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM 等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物，這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細(xì)胞系的培養(yǎng)。
以前經(jīng)常聽到有人問，這種細(xì)胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實這個問題的答案可以很簡單。此話怎講?如果這種細(xì)胞是購自ATCC或Procell的細(xì)胞庫，那很簡單，問供應(yīng)商就行了。或者找到相關(guān)的文獻(xiàn)，作為參考。
但如果你是著手建立一種全新細(xì)胞的培養(yǎng)體系，根本找不到任何參考，那你就得花點時間自己試驗了。萬事開頭難嘛。因為沒有一個標(biāo)準(zhǔn)答案。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，首先選MEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI 1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)會是一個好的開始。你也可以購買幾種培養(yǎng)基來，然后花大約兩周的時間做一個簡單的細(xì)胞生長實驗，來選擇其中較為適合的。有時候你會驚訝地發(fā)現(xiàn)你的最佳培養(yǎng)條件與文獻(xiàn)報道的不同，就算是同一種培養(yǎng)條件，細(xì)胞的生長狀態(tài)也時好時壞，這是很正常的。因為試劑、水、不同批號的血清之間都存在著差異。要提高培養(yǎng)基的穩(wěn)定性，可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手。
以前大部分實驗室都是用干粉培養(yǎng)基，但配制過程就較為繁瑣，要溶解、調(diào)pH值，過濾，過程中可能會產(chǎn)生一些濃度誤差，而且有些實驗室的水質(zhì)并不理想，所以培養(yǎng)的效果會有差異。如果使用液體培養(yǎng)基，這種人為的誤差會減少，因為畢竟是大批量工業(yè)化生產(chǎn)的，批間差會很小。比干粉培養(yǎng)基貴不了多少，而且還幫你省了過濾器和時間。

血清
血清含有生長因子可促進(jìn)細(xì)胞的繁殖，含有附著因子可促進(jìn)細(xì)胞的貼壁，同時還具有抗胰酶活性。血清同時也是礦物質(zhì)、脂類及激素的來源。較為常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的。采血時間越早，營養(yǎng)物質(zhì)越豐富，所含抗體也越少，因而胎牛血清適合要求高的細(xì)胞系和克隆化培養(yǎng)。由于瘋牛病的原因，到目前為止，我國政府仍然禁止從北美洲、歐洲和日本等地區(qū)進(jìn)口牛血清，因此市面上的牛血清大多來自澳洲、南美洲，或是國產(chǎn)的。安培生物目前有代理ZETA LIFE系列澳洲、南美、法國等地來源的進(jìn)口胎牛血清。

溫馨提示：購買血清請不要盲目看品牌，一定要認(rèn)真識別是否是正品！

而血清批次間的差別就是不可避免的，這種差異來源于不同的制備方法和除菌方法、動物的年齡差別及血清的儲存條件等，而且與取血動物的來源關(guān)系密切。不同的牧場、不同的氣候天氣及其他環(huán)境因素都可能影響血清的質(zhì)量。因此選好了一種血清就要盡可能長期使用它。在需要更換時，也要盡量保持與原有的一批血清相似。

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