-
【蛋白技術】蛋白標簽TAG是什么高大上的東西？
發布時間： 2021-09-03 點擊次數： 6092次首先，蛋白標簽（proteintag）是什么？
蛋白標簽（proteintag）是指利用 DNA 體外重組技術，與目的蛋白一起融合表達的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達、檢測、示蹤和純化等。
蛋白標簽大體可分為三大類：遺傳標簽、in vivo 標簽和 in vitro 標簽。大家最熟悉的莫過于遺傳標簽，即 c-Myc、FLAG 等：將目的基因克隆到含有標簽的載體上，以便下游通過抗體或熒光檢測。同時，標簽的存在也方便了蛋白純化。
下面就介紹幾款常用的 tag 給大家掃掃盲：
名聲在外的 Flag-tag:
Flag 標簽蛋白為編碼 8 個氨基酸的親水性多肽（DYKDDDDK），同時載體中構建的 Kozak 序列使得帶有 FLAG 的融合蛋白在真核表達系統中表達效率更高。
優點：
FLAG 作為融合表達標簽，其通常不會與目的蛋白相互作用并且通常不會影響目的蛋白的功能、性質；
融合 FLAG 的目的蛋白，可以直接通過 FLAG 進行親和層析，此層析為非變性純化，可以純化有活性的融合蛋白，并且純化效率高；
FLAG 作為標簽蛋白，其可以被抗 FLAG 的抗體識別，這樣就方便通過 Western Blot、ELISA 等方法對含有 FLAG 的融合蛋白進行檢測、鑒定。
融合在 N 端的 FLAG，其可以被腸激酶切除（DDDK），從而得到特異的目的蛋白。因此現 FLAG 標簽已廣泛的應用于蛋白表達、純化、鑒定、功能研究及其蛋白相互作用等相關領域。
平易近人的 His6-tag：
His6 是指六個組氨酸殘基組成的融合標簽，可插入在目的蛋白的 C 末端或 N 末端。當某一個標簽的使用，一是能構成表位利于純化和檢測；二是構成*的結構特征（結合配體）利于純化。組氨酸殘基側鏈與固態的鎳有強烈的吸引力，可用于固定化金屬螯合層析(IMAC)， 對重組蛋白進行分離純化。
優點：
標簽的分子量小，只有~0.84KD，一般不影響目標蛋白的功能；
His 標簽融合蛋白可以在非離子型表面活性劑存在的條件下或變性條件下純化；
His 標簽融合蛋白也被用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA 相互作用研究；
His 標簽免疫原性相對較低，可將純化的蛋白直接注射動物進行免疫制備抗體；
可應用于多種表達系統，純化的條件溫和；可以和其它的親和標簽一起構建雙親和標簽。
高大上的 GST-tag:
GST(谷胱甘肽巰基轉移酶) 標簽蛋白本身是一個在解毒過程中起到重要作用的轉移酶，它的天然大小為 26KD。
將它應用在原核表達的原因大致有兩個：
一個是因為它是一個高度可溶的蛋白，希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性；
另一個是它可以在大腸桿菌中大量表達，起到提高表達量的作用。
GST 融合表達系統廣泛應用于各種融合蛋白的表達，可以在大腸桿菌和酵母菌等宿主細胞中表達。結合的融合蛋白在非變性條件下用 10mM 還原型谷胱甘肽洗脫。在大多數情況下，融合蛋白在水溶液中是可溶的，并形成二體。GST 標簽可用酶學分析或免疫分析很方便的檢測。標簽有助于保護重組蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其穩定性。在大多數情況下 GST 融合蛋白是*或部分可溶的。
純化：該表達系統表達的 GST 標簽蛋白可直接從細菌裂解液中利用含有還原型谷胱甘肽瓊脂糖凝膠(Glutathionesepharose)親和樹脂進行純化。GST 標簽蛋白可在溫和、非變性條件下洗脫，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST 在變性條件下會失去對谷胱甘肽樹脂的結合能力，因此不能在純化緩沖液中加入強變性劑如：鹽酸胍或尿素等。
如果要去除 GST 融合部分，可用位點特異性蛋白酶切除。
檢測：可用 GST 抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測。
常規化的 c-Myc-tag
C-Myc 標簽蛋白，是一個含 11 個氨基酸的小標簽，標簽序列 Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-GluGlu-Asp-Leu，這 11 個氨基酸作為抗原表位表達在不同的蛋白質框架中仍可識別其相應抗體。 C-Myc tag 已成功應用在 Western-blot 雜交技術、免疫沉淀和流式細胞計量術中, 可用于檢測重組蛋白質在靶細胞中的表達。
- 下一篇：認識蛋白質組學鑒定技術
- 上一篇：酵母雜交實驗——從一無所知到略知一二
銷售熱線
